Del monòmer AEEA al dímer

La relació entre fàrmacs i anticossos (DAR) és un atribut de qualitat clau dels fàrmacs conjugats amb anticossos (ADC) que afecta directament l'eficàcia i la toxicitat. El DAR ideal sol ser 2-4, però moltes càrregues útils eficients, com ara MMAE i DM1, tenen una forta hidrofobicitat. Quan s'utilitzen enllaços PEG de cadena curta o únic, el DAR superior a 4 condueix a l'agregació i eliminació d'anticossos accelerades. La introducció de l'AEEA-AEEA proporciona una solució eficaç a aquest problema.
En comparació amb un únic enllaçador AEEA,AEEA-AEEAduplica la longitud de la cadena PEG i té una hidrofilicitat més forta. Cada unitat dímer aporta 4 enllaços èter i 2 enllaços amida, que poden unir més molècules d'aigua i formar una capa d'hidratació més densa. Quan es connecten diversos fàrmacs hidrofòbics a la superfície d'anticossos mitjançant AEEA-AEEA, la capa d'hidratació pot protegir eficaçment les interaccions hidrofòbiques entre fàrmacs i prevenir l'agregació d'anticossos. Les dades experimentals mostren que els ADC construïts amb AEEA-AEEA mantenen l'estabilitat col·loïdal (taxa d'agregació<5%) even when DAR reaches 6-8, while the control using single AEEA shows significant precipitation when DAR>4.
L'estratègia de regulació del DAR fa referència a l'enllaç previ de l'AEEA-AEEA a un fàrmac en la tecnologia d'acoblament dirigit al lloc i, a continuació, a reaccionar amb cisteïna modificada a l'anticòs. Ajustant la proporció molar del fàrmac enllaçador a l'anticossos (normalment de 3:1 a 10:1), el valor DAR es pot controlar amb precisió. Per exemple, un excés de 2-vegades pot produir un producte DAR2, un excés de 4- vegades pot produir DAR4 i un excés de 8 vegades pot aconseguir DAR6-8. HIC-HPLC o espectrometria de masses poden determinar amb precisió la distribució de DAR. Per a indicacions de tumors que requereixen una càrrega elevada, com ara càncer de mama amb baixa expressió HER2 i càncer de pulmó de cèl·lules petites, l'AEEA-AEEA fa possible un DAR elevat i millora significativament l'efecte de destrucció del tumor. Els estudis preclínics han demostrat que l'ADC de DAR6 augmenta la taxa d'inhibició del tumor en un 40% en comparació amb l'ADC de DAR4 a la mateixa dosi, sense augmentar significativament la toxicitat.